Разработчики «Спутника» ответили на обвинения в сокрытии данных третьей фазы испытаний
В журнале The Lancet, в котором российские ученые ранее опубликовали результаты третьей фазы испытаний вакцины «Спутник», их коллеги разместили открытое письмо. В обращении зарубежные ученые призывают к открытому доступу к рабочим протоколам и данным, которые были получены в ходе испытаний. Разработчики вакцины уже ответили на письмо, утверждая, вся необходимая информация о клинических испытаниях была передана в журнал.
Вакцина от коронавируса «Спутник V» была зарегистрирована в России в августе 2020 года. Результаты первой и второй фазы клинических испытаний были опубликованы в журнале The Lancet сентябре того же года, а третьей фазы – в феврале, когда уже в России уже шла вакцинация граждан.
К отчетам разработчиков уже выдвигались претензии – например, представители российского межрегионального общества специалистов доказательной медицины указывали, что из первичной выборки было исключено подозрительно много испытуемых, а группа зарубежных ученых утверждала, что необходимо больше данных о безопасности вакцины.
Теперь Энрико Буччи (Enrico M Bucci) из Темпльского университета (он же – автор письма с критикой первой и второй фаз исследований) в журнале The Lancet опубликовал свое открытое письмо насчет и третьей фазы. Исследователь с несколькими коллегами утверждает, что не один раз запрашивал у разработчиков необработанные данные, которыми пользовались авторы статьи – обычно такие данные можно получить по запросу – и не получил доступа. Авторы письма указывают, что разработчики ссылаются на тот факт, что третья фаза испытаний еще не окончена, и что им нужно разрешение некоего отдела безопасности, чтобы поделиться данными.
Также авторов письма волнует, что протоколы исследования прописаны, по их мнению, недостаточно подробно. Например, в выборку не включались испытуемые, которые заболели коронавирусной инфекцией – и в статье разработчики ограничились фразой, что «коронавирусная инфекция была диагностирована согласно стандартному протоколу, в том числе ПЦР-тесту». Зарубежные коллеги попросили уточнить, что значит «стандартный протокол», и когда и как было проведено ПЦР-тестирование.
Разработчики ответили авторам письма во все том же журнале The Lancet. Российские ученые утверждают, что всю необходимую информацию направили в журнал перед публикацией. Также ученые пишут, что схема регистрации случаев заражения была подробно описана в статье, и в то же время исследователи не видят смысла публиковать информацию о, например, количестве циклов в ПЦР-реакции – тестирование было проведено по протоколу зарегистрированного в России теста, к которому существует инструкция по применению. Что касается выборки добровольцев, ученые не скрывают, что действительно исключили большое число потенциальных испытуемых: часть из них не подошла под стандартные критерии включения (или подошла под критерии исключения), а часть только прошла скрининг, но не дошла до стадии рандомизации.
Напоследок, российские исследователи отметили, что полученные ими результаты о безопасности и иммуногенности вакцин подтверждены исследованиями в Аргентине.
Ранее бразильский регулятор ANVISA усомнился в безопасности вакцины «Спутник V». Чем могли руководствоваться бразильские чиновники, и обоснованны ли были их опасения, редакция N + 1 разбиралась в материале «Здесь репликанты: чем российская вакцина "Спутник V" напугала бразильского регулятора» .
Вера Сысоева
Исследование провели на личинках дрозофил
Японские исследователи в экспериментах с дрозофилами установили механизм влияния на нейропластичность фермента убиквитинлигазы, функции которого нарушены при синдроме Ангельмана. Как выяснилось, этот фермент в пресинаптических окончаниях аксонов отвечает за деградацию рецепторов к костному морфогенетическому белку, за счет чего устраняются ненужные синапсы в процессе развития нервной ткани. Отчет о работе опубликован в журнале Science. Синдром Ангельмана представляет собой нарушение развития, которое проявляется умственной отсталостью, двигательными нарушениями, эпилепсией, отсутствием речи и характерной внешностью. Его причиной служат врожденные дефекты фермента убиквитинлигазы Е3А (Ube3a), который присоединяет к белкам убиквитин, влияющий на их судьбу в клетке, в том числе деградацию. При синдроме Ангельмана сниженная активность Ube3a нарушает синаптическую пластичность в процессе нейроразвития, в частности элиминацию ненужных синапсов. Повышенная активность этого фермента, напротив, приводит к неустойчивости сформировавшихся синапсов и, как следствие, к расстройствам аутического спектра. Исследования постсинаптических функций Ube3a показали, что он играет роль в нейропластичности, в частности формировании дендритных шипиков. При этом, по данным иммунохимических и электронно-микроскопических исследований, в коре мозга мыши и человека этот фермент экспрессируется преимущественно пресинаптически. Учитывая высокую эволюционную консервативность Ube3a, сотрудники Токийского университета под руководством Кадзуо Эмото (Kazuo Emoto) использовали для изучения его пресинаптических функций сенсорные нейроны IV класса по ветвлению дендритов (C4da) личинок плодовой мухи дрозофилы. Число дендритов этих нейронов резко сокращается (происходит их прунинг) в первые 24 часа после образования куколки, а на последних стадиях ее развития дендриты разветвляются вновь уже по взрослому типу. Используя флуоресцентные метки различных биомаркеров нейронов, исследователи показали, что в ходе этого процесса ремоделированию подвергаются не только дендриты, но и пресинаптические окончания аксонов. Попеременно отключая разные компоненты участвующих в этих процессах молекулярных комплексов, ученые убедились, что для элиминации синапсов под действием сигнального пути гормонов линьки экдизонов необходима только Ube3a, но не куллин-1 E3-лигаза, участвующая в прунинге дендритов. Дальнейшие эксперименты с применением флуоресцентных меток и РНК-интерференции показали, что Ube3a активно транспортируется из тела нейрона в аксон двигательным белком кинезином со средней скоростью 483,8 нанометра в секунду. Создав мутантов с дефектами в различных участках Ube3a, авторы работы выяснили, что связанные с синдромом Ангельмана мутации D313V, V216G и I213T в среднем домене фермента, содержащем тандемные полярные остатки (TPRs), препятствуют его связи с кинезином и транспорту из тела нейрона в аксон. Как следствие, нарушается элиминация ненужных синапсов. Изменения в N-концевом цинк-связывающем домене AZUL и C-концевом HECT влияли на эти процессы в значительно меньшей степени. Ube3a принимает участие в убиквитинировании многих клеточных белков. Чтобы выяснить, какой из них опосредует элиминацию синапсов, авторы работы вызывали в нейронах избыточную экспрессию разных белков-мишеней Ube3a с целью насытить этот фермент и таким образом заблокировать его действие. Оказалось, что выраженные дефекты элиминации синапсов возникают при избыточной экспрессии тиквеина (Tkv) — пресинаптического рецептора к костному морфогенетическому белку (ВМР); прунинг дендритов при этом не затрагивается. Исследование нормальной экспрессии Tkv с помощью флуоресцентных меток показало, что ее уровень значительно снижается через восемь часов после начала формирования куколки. У мутантов, лишенных Ube3a, этого не происходило. Выключение гена tkv или другого компонента сигнального пути BMP — mad — восстанавливало элиминацию синапсов у таких мутантов, то есть за нее отвечает именно этот сигнальный путь. Это подтвердили, восстановив элиминацию синапсов у мутантов без Ube3a антагонистом BMP LDN193189, а также экспрессией белков Glued-DN или Dad, которые подавляют сигнальную активность Mad. Искусственное повышение пресинаптической экспрессии Ube3a в нейронах C4da вызывало массированную преждевременную элиминацию сформировавшихся синапсов и общее уменьшение синаптической передачи у личинок третьего возраста. Это происходило из-за чрезмерного подавления сигнального пути BMP. Таким образом, дефекты убиквитинлигазы Ube3a, лежащие в основе синдрома Ангельмана, приводят к избыточной активности сигнального пути BMP, вследствие чего не происходит устранение ненужных синапсов в процессе развития нервной системы. Этот сигнальный путь может послужить мишенью для разработки новых методов лечения этого синдрома, а возможно и расстройств аутического спектра, считают авторы работы. В 2020 году американские исследователи сообщили, что им удалось предотвратить развитие синдрома Ангельмана у мышей с мутацией материнской копии гена UBE3A. Для этого они с помощью системы CRISPR/Cas9 инактивировали длинную некодирующую РНК UBE3A-ATS, которая подавляет экспрессию отцовской копии UBE3A.