Ингибитор Bcl-2 улучшил качество и функции CAR-T-клеток в пробирке

Американские исследователи провели эксперимент in vitro и выяснили, что добавление ингибитора Bcl-2 венетоклакса в культуру улучшает качественные и функциональные характеристики CAR-T-лимфоцитов на транскриптомном уровне. Результаты представлены на ежегодном слете Американского гематологического общества 66th ASH Annual Meeting and Exposition.

Фактор транскрипции Bcl-2 подавляет апоптоз в различных клетках, включая нервные и кроветворные. Его экспрессия в клетках рецидивирующей и рефрактерной диффузной крупно-В-клеточной лимфомы связана с плохим прогнозом, как при стандартной химиотерапии, так и при использовании препаратов аутологичных анти-CD19 CAR-T-лимфоцитов (подробно об этой технологии можно почитать в материале «Химера против рака»).

Препарат венетоклакс из группы BH3-миметиков специфично ингибирует активность Bcl-2, стимулируя апоптоз злокачественных клеток. Он одобрен к применению при хроническом лимфолейкозе и остром миелобластном лейкозе, а также проходит испытания при других онкогематологических заболеваниях. При этом, несмотря на проапоптотический эффект в опухолевых лимфоидных клетках, этот препарат стимулировал активность CAR-T-клеток в исследовании с использованием проточной цитометрии.

Чтобы разобраться в механизмах этого эффекта, Тейлор Мэндивилл (Taylor Mandeville) из Онкоцентра Розуэлла Парка с коллегами изготовили α-CD19 CAR-T-клетки второго поколения с ко-стимуляторными доменами CD28ζ или 4-1BBζ из лимфоцитов трех здоровых доноров и активировали их. После 10–14 дней размножения эти клетки на сутки поместили в совместную культуру с моделью резистентной к ритуксимабу CD19⁺ лимфомы Raji4RH с добавлением венетоклакса и без него. В качестве контроля использовали нетрансдуцированные Т-лимфоциты доноров. Спустя сутки совместной инкубации CAR-T-клетки и контрольные лимфоциты выделили и выполнили секвенирование их РНК.

Добавление венетоклакса значительно повышало в CAR-T-лимфоцитах экспрессию генов, связанных с цитотоксичностью (IFNG, GZMB), активацией и выживанием (CD69, IL2), памятью и иммуномодуляцией (TCF7, IL12RB2, FOXP3) и митохондриальной функцией (ITPR3, MCU, VDAC1). Экспрессия BCL2 предсказуемо снижалась, но другого гена этого семейства — MCL1 — компенсаторно повышалась.

Таким образом, венетоклакс улучшил качество и функции α-CD19 CAR-T-лимфоцитов in vitro за счет регуляции экспрессии их функциональных генов. Учитывая локализацию Bcl-2 на эндоплазматическом ретикулуме, где он ингибирует ток кальция через канал IP₃R (ITPR3), авторы работы предположили, что препарат индуцирует специфичные для Т-лимфоцитов функции путем модуляции кальциевых сигнальных путей.

На том же слете другая научная группа представила результаты доклинических испытаний, согласно которым повысить активность CAR-T-клеток можно с помощью кетогенной диеты и ее ключевого метаболита — бета-гидроксимасляной кислоты. Уже начаты клинические испытания этого метода.